生物转化法生产茶氨酸的重组大肠杆菌的构建

2021-02-24 13:44:35热度:153°C

为构建生物转化法生产氨酸的基因工程菌,作者分析了影响大肠杆菌高效表达γ-谷氨酰基转肽酶的几个主要因素.将大肠杆菌JM109的ggt基因接入两种不同的质粒中后,转化大肠杆菌JM109,并在一定的条件下进行表达.通过对比E.coliJ M109和转化子的γ-谷氨酰基转肽酶表达活性的不同,探讨了ggt基因的拷贝数、启动子的强弱等几个因素对γ-谷氨酰基转肽酶高效表达的影响.实验表明,将含有自身信号肽和启动子的E.coli JM109的ggt基因接入高拷贝的质粒pUC18中,仅提高ggt基因的拷贝数不能增加γ-谷氨酰基转肽酶的表达量.将含有自身信号肽但不含有自身启动子的E.coli JM109的ggt基因接入具有tac启动子的表达载体pEtac中,发现在强启动子tac的控制下,γ-谷氨酰基转肽酶的表达量提高至出发菌株的2.3倍.将构建的工程菌用于生物转化法生成茶氨酸,底锈转化率相应地提高至出发菌株的1.7倍.

完成机构:[1]江南大学生物工程学院,江苏无锡214036 [2]南昌大学中德联合研究院,江西南昌330047

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