微波辅助水提取云南凤尾茶总黄酮工艺的研究凤尾茶（Elsholtzia bodinieri Vaniot），又名东紫苏、野山茶、凉茶、牙刷草、小香薷等，为唇形科香薷属一年生草本植物，生于山坡、路旁草丛中或灌木林下。主要分布在云南、甘肃、四川、青海等西部地区，是一种常用的民间中草药。其味甘苦微辛、性平，具有发散解表，理气和胃之功效，主治外感风寒、头身痛、咽喉痛、消化不良和肝炎等症。据本草考证，香薷属植物最早记载为药食兼用，后在应用中各有侧重而出现药食功能分离。凤尾茶是目前该属植物唯一保留食用功能的品种。滇南各少数民族由于喜食腥燥食物，常以凤尾茶作为日常茶饮。据报道，凤尾茶的化学成分主要含有黄酮类化合物、挥发油、萜类和甾体等。已有研究对凤尾茶总黄酮的提取均采用了有机溶剂乙醇，如胡浩斌等采用微波辅助流动萃取法对甘肃东紫苏中的黄酮类成分进行了提取和测定，确定了最佳提取工艺条件，证明根中的含量最高为133.7mg／g，茎次之为78.51mg／g，叶中较低为25.47mg。陈海云等用A1C13分光光度法对云南风尾茶中总黄酮的含量进行了分析，结果表明风尾茶中黄酮主要集中在叶部，根部含量最少，全株含量为10.49％。而热水浸提凤尾茶的研究未见报道。水提取法具有简单易行、安全性高、投入资金少的特点，且日常生活中凤尾茶也是以水冲泡进行饮用的，所以以水为溶剂提取凤尾茶中的总黄酮具有一定的研究意义。与天然产物的传统提取方法比较，微波辅助提取技术具有方便、省时、能耗少等优点，本实验采用微波辅助的方法，以水为溶剂对云南风尾茶中的总黄酮进行提取，测定了总黄酮的提取率，确定了最佳提取工艺条件。并与热水浸提比较，证明微波提取法确实是一种高效快捷且浸提率高的方法。

1材料与方法

l。l材料与仪器

凤尾茶采自云南省建水县。芦丁对照品，购于中国药品生物制品检定所；其他试剂均为分析纯。G8023ETL.V8微波炉，顺德格兰仕电器有限公司；FA1004电子天平，上海天平仪器厂；722光栅分光光度计，上海分析仪器厂。

1.2方法与步骤

l_2.1标准曲线的制定：

凤尾茶中总黄酮含量的测定采用AICI3比色法。准确称取在120~C干燥至恒重的芦丁对照品5.0mg，加无水乙醇溶解，定容至100mL容量瓶中，摇匀。准确地吸取此溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置于10mL容量瓶中，精密加0.Imol／L的三氯化铝溶液3mL，HAc-NaAc缓冲溶液（pH5.8）定容至刻度。放置30min，用第一瓶溶液作空白，在波长420nm处测定吸光度，以质量浓度（mg／mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，得回归方程y：0.1076+1.828X.r=0.9978。

1.2.2样品的提取及总黄酮含量的测定：

凤尾茶全草，粉碎，过20目筛备用。精密称取一定量样品，按一定的料液比，加入90~C热水并保温30min后，放入微波炉中，选择适当的功率和时间提取，取出定容、过滤。精确吸取lmL，稀释5倍，加入试剂和方法同“1.2.1标准溶液的制定”。根据所测吸光度和标准曲线得出微波辅助水提法总黄酮的含量。总黄酮提取率=（总黄酮质量浓度×定容体积）x5／样品质量×100％

1.2.3提取工艺的单因素考察

1.2.3.1不同料液比对提取率的影响

分别以20、30、40、50、60倍的90℃热水对凤尾茶保温30min后，300W微波加热5min，发现总黄酮的提取率在料液比为1：40时最高。

1.2.3.2不同微波提取时问对提取率的影响

以40倍热水对样品保温浸提30min后，300W微波加热2min、5min、10mill、15min后，结果为总黄酮的提取率在加热5min时达到一个峰值。

1.2.3_3微波功率对提取率的影响

以40倍热水对样品保温浸提30min后，选择200W、300W、400W、500W、600W五个功率档分别对样品进行加热提取，结果表明总黄酮提取率在400W时增加最快，600W时提取率最低。

1.2.4正交试验优化

在单因素试验的基础上选取微波功率、提取时间、料液比作为影响提取效果的主要因素，进行3因素、3水平正交试验（表1）。并对结果进行极差和方差分析。

1.2.5方法的重复性、稳定性、回收率实验

精密称取样品5份，根据正交试验得出的最佳实验条件，对凤尾茶样品中黄酮类成分的含量进行测定。精密吸取样品总黄酮提取液0.5mL共5份，分别加入不同体积的10ug/ml的芦丁标准溶液进行回收率实验。在60min内每隔15min分别测定样品和标准对照品溶液的吸光度以确定方法的稳定性。

1.2.6热水浸提与微波水提取的比较90℃热水浸提30min，测定黄酮含量；采用最佳提取工艺条件，但不经90℃热水浸提30min，比较两种方法的提取率。

2结果与分析

2.1正交试验结果

表1因素水平

表2正交试验设计及结果

由正交试验的极差分析可知，各因素影响顺序为A>C>B，即时间>溶剂用量>功率，最佳工艺条件为A2B2C1，即提取时间5min，微波功率400w，溶剂用量为30倍。空白列即误差列的R值小于各因素的值，因此试验结果具有有效性。方差分析结果显示，A、B、C三因素的影响没有显着性差异（>0.05），从P值的大小中反映出A因素的影响最大，这与极差分析的结果相符合。

表3正交试验结果的方差分析

2.2重复性、稳定性、回收率实验结果

精密称取样品5份，根据以上所选最佳实验条件，对凤尾茶样品中黄酮类成分的含量进行测定。由表4结果可知，样品总黄酮含量平均为52.35mg／g，RSD为1.12％。说明该方法的重复性较好。表2正交试验中第6组总黄酮提取率为54.38mg／g，高于精密度实验的结果，可能由于实验方法和操作上存在一定误差精密吸取样品总黄酮提取液0.5mL共5份，分别u），NN体积的10ug/ml的芦丁标准溶液进行回收率实验。由表5结果可知，样品加标后回收率在95.74％～102.42％之间，平均回收率达99.69%。

表4重复性实验结果

表5回收率实验结果

在60min内每隔15arin分别测定样品和标准对照品溶液的吸光度，吸光度值均未发生改变。放置2、4、8h，吸光度也基本不变，说明各样品提取液及芦丁标准品显色反应较稳定。2-3热水浸提与微波水提取的比较结果单纯用90℃热水浸提30min，总黄酮提取率为4.489％，明显低于热水浸提后再在最佳提取条件下用微波辅助提取的5.235％，若不经90℃热水浸提30min，其余条件不变，总黄酮的提取为4.861％。进一步说明了微波提取法可提高待测组分的提取率，而在本实验中，微波提取前先用热水浸提也是必要的。

3结论

云南凤尾茶是一种富含黄酮类化合物的药食两用的植物，通过本实验确定了微波辅助水提取其中总黄酮的最佳工艺为：原料经90℃热水浸提30min，料液比1：30，微波功率400W，微波提取时间5rnin，提取率为5.235％。说明微波提取法作为一种高效、节能、省时的技术用于云南风尾茶总黄酮的测定是可行的。该实验对云南风尾茶的开发研究和综合利用奠定了理论基础。

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