少动鞘氨醇单胞菌ZX4儿茶酚2,3-双加氧酶基因的克隆与表达

2021-02-22 12:01:07热度:153°C

应用PCR方法克隆了少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas-paucimobilis)ZX4菌株的儿酚2,3一双加氧酶基因(c250-ZX4)。核苷酸序列测定与分析表明,该基因片段全长924 bp且具有一个完整的阅读框,编码306个氨基酸残基。该基因与已报道的来自菌株S.yanoikuyae B1和Sphingomonas sp、KMG425的xylE基因(编码产物均为C230)具有较高的核酸序列同源性,分别为94.37%和94.05%。通过胁以Ⅲ和Xho I两个限制性酶切位点将该基因连接到质粒pET30(a)+上得到重组表达质粒pET-S3,并在E.coli BL21进行了表达,得到了42.3kD的融合蛋白。酶活测定发现该基因工程菌株的发酵产酶活力明显高于出发菌株。

完成机构:[1]上海市农业科学院环境科学研究所,上海201106 [2]浙江大学生命科学院,杭州310029

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