山茶ISSR扩增条件的优化

2021-02-22 11:47:46热度:160°C

以山茶基因组DNA为材料,测试山茶ISSR扩增的最适退火温度,并采用单因素试验,测试了模板DNA量,Mg^2＋浓度,dNTP浓度,BSA浓度,引物用量,Taq酶用量等6个因素对山茶ISSR扩增的影响。结果显示：山茶ISSR扩增的最适退火温度为56.3℃;适宜的扩增体系为：10μL PCR反应体积中,1×Taq酶配套缓冲液（10 mmol·L^-1Tris.HCl pH 9.0,50mmol·L^-1KCl,0.1%Triton X-100）,2 mmol·L^-1MgCl2,0.6 mmol·L^-14×dNTP,2 mg·ml^-1BSA,16 ng模板DNA,10 pmol引物,0.5 U Taq酶。

完成机构：[1]北京林业大学自然保护区学院,北京100083 [2]台州学院生态研究所,浙江临海317000 [3]台州市农业科学研究院,浙江临海317000

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