[目的]为建立油
茶RAPD分析的最佳反应体系。[方法]分别用改良SDS法和CTAB法从12个油茶品种的新鲜幼叶中提取基因组DNA。通过测定OD260和OD280来比较两种方法提取DNA的纯度。建立油茶的RAPD反应程序,通过优化反应条件获得油茶RAPD分析的最佳反应体系。[结果]CTAB法提取的油茶基因组DNA纯度高于SDS法。油茶RAPD分析的最佳反应体系为:1.0UTaqDNA聚合酶、1.5mmol/LMgCl2、200p.mol/LdNTP、10pmol/L随机引物、20ngDNA模板、2μl10×PCR buffer,加重蒸水至20出。油茶的RAPD反应程序为:95℃预变性3min;94℃变性1min,40℃退火1min,72℃延伸2min,40循环;72℃延伸7min。[结论]该研究所用DNA纯度较高,反应条件控制严格,试验中扩增稳定性较好,是适合油茶RAPD分析的最佳反应体系。
完成机构:南昌理工学院生环系,江西南昌330013
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